Вспомогательный хэтчинг
Процедура вспомогательного хэтчинга сводится к нанесению специальных насечек на оболочке эмбриона, которые помогают его высвобождению из внешней оболочки (zona pellucida) в случае ее уплотнения.
Вокруг яйцеклетки располагается внеклеточная оболочка, так называемая прозрачная зона (zona pellucida). Функциями этой оболочки являются:
- оплодотворение яйцеклетки (zona pellucida содержит рецепторы "распознавания" сперматозоидов и связывания с ними);
- защитная функция яйцеклетки (защита яйцеклетки/эмбриона в период прохождения по маточным трубам)
Для прикрепления эмбриона в слизистой оболочке матки эмбрион освобождается от zona pellucida. Плотность рассматриваемой оболочки яйцеклетки может меняться из-за влияния разнообразных факторов, что может помешать возникшему эмбриону самостоятельно высвободится из zona pellucida - он соответственно не сможет прикрепиться в полость матки.
Причины изменения плотности zona pellucida:
- возрастной фактор (вероятные эндокринные изменения у женщин, связанные с возрастом);
- культивирование эмбрионов вне организма женщины (недостаток в среде, используемой для культивирования, некоторых веществ);
- криоконсервация эмбрионов.
Показания к проведению вспомогательного хэтчинга:
- возраст пациентки более 38 лет;
- предыдущие неудачные попытки прикрепления эмбриона;
- эмбрионы с плохими показателями качества;
- высокий уровень фолликулостимулирующего гормона (ФСГ);
- перенос эмбрионов после криоконсервации;
- курение.
Инкубирование эмбриона
* В 1990 г. Jacques Cohen с коллегами разработал технику вспомогательного хетчинга для улучшения результатов искусственной репродукции (Cohen J et al., 1990). Ооцит окружен плотной, но эластичной блестящей зоной. Она защищает ооцит и представляет собой барьер для сперматозоидов, тем самым обеспечивая оплодотворение только одним сперматозоидом. Во время первых делений клеток эмбриона блестящая зона удерживает изначально свободно примыкающие клетки вместе. На шестой или седьмой день эмбриогенеза из блестящей зоны инкубируется бластоцист, и это является предварительным условием для имплантации эмбриона в матку.
Вспомогательный хетчинг призван облегчить этот процесс с помощью перфорирования и утоньшения блестящей зоны. Вспомогательный хетчинг в настоящее время применяется в оплодотворении in vitro у пациентов с неблагоприятным прогнозом успешного завершения беременности, таких как повышенный возраст матери, предшествующие неудачные попытки искусственного оплодотворения или внутриклеточной инъекции сперматозоида несмотря на успешное оплодотворение, криоконсервированные эмбрионы или ненормальная толщина блестящей зоны. Применялось несколько видов техники для вспомогательного хетчинга: первоначально делался надрез в блестящей зоне (частичное рассечение зоны, PZD), но этот метод является очень сложным. Растворение зоны с использованием раствора тирода является наиболее широко применяемым методом с тем недостатком, что подбор правильной дозы кислоты для получения отверстия нужного размера является трудной задачей. В противоположность этим методикам, перфорирование эмбриона с помощью инфракрасного лазера представляет собойпростую, быструю, надежную и воспроизводимую технику.
Эмбрион без лазерного просверливания (a), с единственным отверстием (b) и с двумя перекрывающимися отверстиями (c)
Просверливание отверстия определенного диаметра в блестящей зоне требует правильной установки продолжительности излучения лазера в соответствии с биологическими параметрами. При вспомогательном хетчинге размер просверленного отверстия должен составлять приблизительно 1,5 толщины блестящей зоны. Стратегия минимальной инвазивности предполагает создание канала посредством двух отверстий с диаметром 20 μм, т.е. немного больше, чем толщина блестящей зоны (обычно 16–18 μм в эмбрионе человека). Перекрытие приблизительно на 50% образует отверстие нужного размера. Благодаря 50%-ному перекрытию, такой метод надежен по отношению к небольшим изменениям в фактической толщине блестящей зоны.
